Estudio de los efectos de un microambiente hipóxico en queratinocitos humanos in vitro y su correlato con alteraciones del microambiente en la patología de liquen plano oral

La hipoxia es un factor fundamental en el proceso de génesis tumoral, así como en patologías precursoras de cáncer, como es el Liquen Plano Oral (LPO). Objetivo: Determinar si es posible establecer una correlación entre las alteraciones que sufren queratinocitos normales en un microambiente hipóxico in vitro y alteraciones que aparecen en los queratinocitos en el epitelio de la mucosa oral en el contexto de la patología LPO. Métodos: Se estudiaron los cambios morfológicos mediante microscopía de contraste de fases, y la detección de marcadores asociados a hipoxia de queratinocitos humanos (HaCaT), como modelo celular oral, en un microambiente hipóxico generado por la variante del método "Hipoxia inducida por cubreobjetos". Resultados: Mediante microscopía confocal se observó la presencia de los marcadores de hipoxia GLUT-1 y aductos de pimonidazol (Hipoxyprobe) en los cultivos celulares de HaCaT expuestos a un microambiente hipóxico. Además, se observó la presencia del marcador GLUT-1 mediante inmunohistoquímica en tejido epitelial humano derivado de biopsias de la patología LPO. Conclusiones: Se estableció una correlación entre las alteraciones detectadas en queratinocitos humanos inducidos a un microambiente hipóxico in vitro y las alteraciones detectadas in vivo en tejido epitelial de la mucosa oral.

A hipóxia é um fator fundamental no processo de gênese tumoral, bem como em patologias precursoras do câncer, como o Líquen Plano Oral (LPO). Objetivo: Determinar se é possível estabelecer uma correlação entre as alterações que os queratinócitos normais sofrem em um microambiente hipóxico in vitro e as alterações que aparecem nos queratinócitos no epitélio da mucosa oral no contexto da patologia do LPO. Métodos: As alterações morfológicas foram estudadas por microscopia de contraste de fase e a detecção de marcadores associados à hipóxia de queratinócitos humanos (HaCaT), como modelo de célula oral, em um microambiente hipóxico gerado pela variante do método "Hipóxia induzida por lamínulas". Resultados: Por microscopia confocal, observou-se a presença dos marcadores de hipóxia GLUT-1 e Hipoxyprobe em culturas de células HaCaT expostas a um microambiente hipóxico. Além disso, a presença do marcador GLUT-1 foi observada por imuno-histoquímica em tecido epitelial humano derivado de biópsias de patologia de LPO. Conclusões: Foi estabelecida uma correlação entre as alterações detectadas em queratinócitos humanos induzidas em um microambiente hipóxico in vitro e as alterações detectadas in vivo no tecido epitelial da mucosa oral.

Hypoxia is a fundamental factor in the process of tumor genesis, as well as in precursor pathologies of cancer, such as Oral Lichen Planus (OLP). Objective: To determine if it is possible to establish a correlation between the alterations that normal keratinocytes suffer in a hypoxic microenvironment in vitro and alterations that appear in the keratinocytes in the epithelium of the oral mucosa in the context of OLP pathology. Methods: Morphological changes were studied by phase contrast microscopy, and the detection of markers associated with hypoxia of human keratinocytes (HaCaT), as an oral cell model, in a hypoxic microenvironment generated by the variant of the method "Hypoxia induced by coverslips". Results: Using confocal microscopy, the presence of hypoxia markers GLUT-1 and Hipoxyprobe was observed in HaCaT cell cultures exposed to a hypoxic microenvironment. In addition, the presence of the GLUT-1 marker was observed by immunohistochemistry in human epithelial tissue derived from biopsies of OLP pathology. Conclusions: A correlation was established between the alterations detected in human keratinocytes induced in a hypoxic microenvironment in vitro and the alterations detected in vivo in epithelial tissue of the oral mucosa.

Síndrome de Steven Johnson: Caso clínico / Steven Johnson syndrome: Clinical case

Resumen El síndrome de Stevens-Johnson (SJS) y la necrosis epidérmica tóxica (TEN) son consideradas como un espectro de enfermedades cutáneas raras pero potencialmente fatales. Se presenta el caso de una mujer de 55 años, con antecedente de epilepsia secundario a angiomas cavernosos en manejo con fenitoína. Asistió por cuadro clínico de dos días de evolución consistente en edema facial asociado a rash pruriginoso en región toracocervical, disfagia y picos febriles no cuantificados. A la exploración física conhiperemia e inyección conjuntival, edema de labios superior e inferior con lesiones tipo aftas blanquecinas y dolorosas. En piel, exantema maculopapular, confluente y eritematoso que desaparece a la digitopresión, de predominio en tronco y extremidades superiores. Ante estos resultados se sugirió que la paciente estuviera cursando con un síndrome de Steven Johnson. Esta es una patología de baja prevalencia, generalmente secundaria a una reacción idiosincrática que en la mayoría de los casos se produce por medio de medicamentos como los antibióticos, anticonvulsivantes, antiinflamatorios no esteroideos, entre otros. El manejo se basa en un diagnóstico temprano, retiro de las sustancias causales, realizar una vigilancia estricta de líquidos corporales, temperatura, aislamiento y un adecuado cuidado de la piel. Dentro de las medidas farmacológicas se puede usar la inmunoglobulina intravenosa.

Summary Stevens-Johnson syndrome (SJS) and toxic epidermal necrosis (TEN) are considered as a spectrum of rare but potentially fatal skin diseases. The case of a 55-year-old woman with a history of epilepsy secondary to cavernous angiomas under management with phenytoin is presented. She attended for a clinical picture of two days of evolution consisting of facial edema associated with pruritic skin eruption in the thoracocervical region, dysphagia and unquantified feverish peaks. On physical examination with hyperemia and conjunctival injection, upper and lower lip edema with whitish and painful thrush-like lesions. In the skin, a maculopapular, confluent and erythematous rash that disappears when digitopressured, predominantly in the trunk and upper extremities. Given these results, it was suggested that the patient be studying with Steven Johnson syndrome. This is a pathology of low prevalence, generally secondary to an idiosyncratic reaction that in most cases occurs through medications such as antibiotics, anticonvulsants, non-steroidal anti-inflammatory drugs, among others. Management is based on early diagnosis, removal of causal substances, strict monitoring of body fluids, temperature, isolation and proper skin care. Within pharmacological measures, intravenous immunoglobulin can be used.

Molecular mechanisms in the process of re-epithelization in wound healing and the action of honey in keratinocytes / Mecanismos moleculares en el proceso de re-epitelización en cicatrización de heridas y la acción de la miel en queratinocitos

SUMMARY: The treatment of chronic wounds has become a public health issue in recent years mainly due to comorbidities associated with an older population and bacterial resistance. Honey has emerged as an alternative treatment for chronic wounds but lack of knowledge of its mechanism of actionin the treated tissue and low quality of evidence in clinical triads has distanced the medical community from honey as a possible treatment. One of the main processes that is altered in chronic wounds is re-epithelialization mediated by keratinocytes, where proliferation and migration processes are altered. Markers of proliferation, migration and activation of keratinocytes, such as adhesion molecules, growth factors, membrane receptors, signal translating proteins, transcription factors, microRNAs, among others are deregulated in this process. In general, honeys from different floral origins have a positive effect on markers of proliferation and migration in keratinocytes. In conclusion there are still few studies that focus on the molecular action of honey in keratinocytes and fail to report details on the honey used not allowing to achieve the same results.

RESUMEN: El tratamiento de heridas crónicas (HC) se ha vuelto un tema de salud pública en los últimos años, principalmente debido a comorbilidades asociadas a una población de mayor edad y a la resistencia bacteriana. La miel ha surgido como un tratamiento alternativo para HC pero la falta de conocimiento de su mecanismo de acción en el tejido tratado y de la baja calidad de la evidencia en triadas clínicas, ha distanciado a la comunidad médica de la miel como posible tratamiento. Uno de los principales procesos que se ve alterado en las HC es la re-epitelización mediada por queratinocitos, donde se ven alterados los procesos de proliferación y migración. Marcadores de proliferación, migración y activación de queratinocitos, como moléculas de adhesión, factores de crecimiento, receptores de membrana, proteínas traductores de señales, factores de transcripción, microARNs, entre otras, se ven desreguladas en éste proceso. De manera general las mieles de diferentes orígenes florales tienen un efecto positivo en marcadores de proliferación y migración en queratinocitos. En conclusión aún existen pocos estudios que se enfoquen en la acción molecular de la miel en queratinocitos y los pocos que existen fallan en la entrega de información en relación a la miel utilizada que pueda hacer reproducibles los resultados.

Opções cirúrgicas no vitiligo: enxerto de raspado cutâneo e suspensão epidérmica diluídos em ácido hialurônico gel / Surgical options in vitiligo: skin graft and epidermal suspension diluted in hyaluronic acid gel

Introdução: vitiligo é dermatose caracterizada por redução física e/ou funcional dos melanócitos. Apresentamos duas propostas cirúrgicas para tratamento do vitiligo. Relato de caso: 1) Implante de enxerto cutâneo diluído em gel de ácido hialurônico: material obtido a partir de curetagem da área doadora, diluído em ácido hialurônico gel e aplicado na área receptora. 2) Suspensão não cultivada obtida por curetagem e diluída em gel de ácido hialurônico: material obtido por curetagem da área doadora é tratado com tripsina, centrifugado, diluído em ácido hialurônico gel e aplicado na área receptora. Conclusão: Trata-se de técnicas seguras, de fácil execução e com resultado satisfatório nos casos apresentados.

Introduction: Vitiligo is an acquired skin dyschromia characterized by the physical and/or functional reduction of melanocytes. We present two surgical proposals for the treatment of vitiligo. Case reports: 1) Implant of skin graft diluted in hyaluronic acid gel: We obtained the material through curettage, diluted it in hyaluronic acid gel, and applied it to receptor areas. 2) Epidermal suspension obtained through curettage and diluted in hyaluronic acid gel: After the curettage of the donor area, we treated the material with trypsin-EDTA, centrifuged it, and diluted it in hyaluronic acid gel. The receptor area received the graft. Conclusion: These are safe, easy, and satisfactory surgical procedures for the presented cases.

Evaluation of the keratinocytes or fibroblasts culture supernatant in an inflammatory hyperalgesia model / Avaliação do sobrenadante da cultura de queratinócitos ou fibroblastos em modelo de hiperalgesia inflamatória

ABSTRACT BACKGROUND AND OBJECTIVES: Inflammation is a defense response of the body to a cellular damage caused by physical, chemical or biological agents, which triggers, among other factors, pain. Although inflammation plays an important role in the protection and regeneration of tissue injury, inflammatory pain results in decreased quality of life. In view of this, the development of safe and less invasive forms for the treatment of inflammatory pain is of great importance. The objective of this study was to evaluate the antihyperalgesic potential of the culture supernatant of keratinocytes and human fibroblasts in an experimental model of inflammatory hyperalgesia. METHODS: Evaluation of carrageenan induced inflammatory hyperalgesia through the use of electronic von Frey in animal models treated with culture supernatant of keratinocytes and fibroblasts. RESULTS: Local administration of naloxone, a nonselective opioid antagonist, in peripheral tissue, has been observed to inhibit the antihyperalgesic effect of the keratinocyte culture supernatant. Fibroblast culture supernatant on days 1 and 3 reverses for 2 hours the carrageenan induced inflammatory hyperalgesia, which is mediated by µ opioid agonist. CONCLUSION: This study indicates that culture supernatant of fibroblasts and keratinocytes is capable of inducing antinociception in inflammatory hyperalgesia, mediated by the release of endogenous opioids. In addition, it has been observed that the analgesic effect of the fibroblast culture supernatant is mediated specifically by the µ opioid agonist, having a duration of 2 hours.

RESUMO JUSTIFICATIVA E OBJETIVOS: A inflamação é uma resposta de defesa do organismo a uma lesão celular causada por agentes físicos, químicos ou biológicos, a qual desencadeia, entre outros fatores, a dor. Apesar da inflamação possuir um importante papel na proteção e regeneração da lesão tecidual, a dor inflamatória culmina na diminuição da qualidade de vida. Diante disso, é de grande importância o desenvolvimento de formas seguras e menos invasivas para o tratamento da dor inflamatória. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial anti-hiperalgésico do sobrenadante de cultura de queratinócitos e fibroblastos humanos em modelo experimental de hiperalgesia inflamatória. MÉTODOS: Avaliação da hiperalgesia inflamatória induzida por carragenina através do uso de von Frey eletrônico em modelos animais tratados com sobrenadante de cultura de queratinócitos e fibroblastos. RESULTADOS: Observou-se que a administração local de naloxona, antagonista opioide não seletivo, em tecido periférico inibiu o efeito anti-hiperalgésico do sobrenadante da cultura de queratinócitos. Sobrenadante de cultura de fibroblastos dos dias 1 e 3 reverte por 2h a hiperalgesia inflamatória induzida por carragenina, sendo esta mediada por agonista µ opioide. CONCLUSÃO: Este estudo indicou que sobrenadante de cultura de fibroblastos e queratinócitos foi capaz de induzir antinocicepção em hiperalgesia inflamatória, mediada pela liberação de opioides endógenos. Além disso, foi observado que o efeito analgésico do sobrenadante de cultura de fibroblastos é mediado especificamente por agonista µ opioide, tendo uma duração de 2 horas.

Hidrogel de quitosana com nanofibras de Policaprolactona (PCL) associado a extratos fitoterápicos no metabolismo celular e ação antimicrobiana: estudo in vitro / Evaluation of the chitosan hydrogel with PCL nanofibers associated with phytotherapeutic extracts in cellular and microbiological activity: in vitro study

O objetivo neste estudo foi produzir hidrogel de quitosana (CH) com PCL e fitoterápicos para uso preventivo de úlcera de pressão. Os hidrogéis de CH foram produzidos com glicerofosfato (GP) e com xantana (X), associados ao PCL e foram caracterizados por estereomicroscopio, intumescimento, molhabilidade e MEV. Posteriormente foram submetidos ao teste de viabilidade (MTT) com fibroblastos HFF-1 e queratinócitos HaCat. O hidrogel que apresentou melhor resultado foi escolhido para continuar na pesquisa. Posteriormente, extratos de Pfaffia panculata K, Juglans regia L, Rosmarinus officinalis L, Zingiber officinale, Própolis e Hamamelis foram colocados em contato com cepas de Staphylococcus aureus (S.a) (ATCC 6538), Streptococcus pyogenes (S.p) (ATCC 19615), Staphylococcus epidermidis (S.e) (ATCC 12228), Pseudomonas aeruginosa (P.a) (ATCC 15442), Escherichia coli (E.c) (ATCC 25922) e Klebsiella Pneumoniae (K.p) (ATCC 4352) na forma planctônica nos testes de CIM e CMM. Os dois melhores extratos fitoterápicos foram avaliados quanto ao sinergismo no teste checkerboard e posteriormente associados ao hidrogel anteriormente eleito. A seguir, o comportamento da HaCat e HFF-1 com os hidrogéis foi analisado por MTT, proteína total, ELISA, genotoxicidade e formação de biofilme monotípico com suspensões padronizadas (107 cel/mL) de S.a, S.e, S.p, P.a, E.c e K.p. Na caracterização e viabilidade o hidrogel CHX PCL apresentou os melhores resultados. Os extratos selecionados após CIM, CMM e checkerboard foram gengibre (G) e própolis (P). O extrato G se destacou na CIM com inibição de K. p e P. a. Os extratos de G e P demonstraram ação microbicida para K. p e P. a e somente o extrato P obteve ação microbicida para S. a na CMM. Houve ação aditiva dos extratos associados no checkerboard para S.p e ação aditiva e sinérgica para S. e. Os grupos de hidrogéis foram compostos por: quitosana xantana (CHX), CHX própolis (CHXP), CHX gengibre (CHXG) e CHX própolis e gengibre associados (CHXPG), todos associados ao PCL. Todos os hidrogéis demonstraram viabilidade celular acima de 70% do grupo controle, permitindo metabolismo celular observado na proteína total. Houve quantificação de IL-6 maior no grupo CHX nas duas linhagens de células enquanto a quantificação de IL-10 não exibiu diferença estatística entre os grupos. Todos os hidrogéis promoveram redução acentuada de biofilme de K.p e E.c. Os grupos CHX, CHXP e CHXG reduziram biofilme de S.e. O grupo CHXG reduziu biofilme de S.p. Para S.a e P.a o grupo CHXPG foi mais eficaz reduzindo biofilme. Concluímos que os hidrogéis apresentaram resultados satisfatórios e promissores, trazendo inovação por associação de biopolímeros e associação de extratos fitoterápicos pouco estudados. Os resultados positivos justificam a continuidade dos estudos com esse biomaterial(AU)

The aim of this study was to produce chitosan hydrogel (CH) with PCL and herbal medicines for preventive use of pressure ulcers. The CH hydrogels were produced with glycerophosphate (GP) and xanthan (X), associated with PCL and were characterized by stereomicroscope, swelling, wettability and SEM. Subsequently, they were submitted to a viability test (MTT) with HFF-1 fibroblasts and HaCat keratinocytes. The hydrogel that presented the best result was chosen to continue the research. Subsequently, extracts of Pfaffia panculata K, Juglans regia L, Rosmarinus officinalis L, Zingiber officinale, Propolis and Hamamelis were placed in contact with strains of Staphylococcus aureus (Sa) (ATCC 6538), Streptococcus pyogenes (Sp) (ATCC 19615), epidermidis (Se) (ATCC 12228), Pseudomonas aeruginosa (Pa) (ATCC 15442), Escherichia coli (Ec) (ATCC 25922) and Klebsiella Pneumoniae (Kp) (ATCC 4352) in planktonic form in CIM and CMM tests. The two best herbal extracts were evaluated for synergism in the checkerboard test and subsequently associated with the previously elected hydrogel. Next, the behavior of HaCat and HFF-1 with hydrogels was analyzed by MTT, total protein, ELISA, genotoxicity and monotypic biofilm formation with standardized suspensions (107 cel / mL) of Sa, Se, Sp, Pa, Ec and Kp In the characterization and viability the CHX PCL hydrogel presented the best results. The extracts selected after MIC, CMM and checkerboard were ginger (G) and propolis (P). The G extract stood out in the MIC with inhibition of K. p and P. a. The extracts of G and P showed microbicidal action for K. p and P. a and only the extract P obtained microbicidal action for S. a in CMM. There was an additive action of the associated extracts on the checkerboard for S.p and an additive and synergistic action for S. e. The hydrogel groups were composed of: xanthan chitosan (CHX), CHX propolis (CHXP), CHX ginger (CHXG) and CHX propolis and ginger associated (CHXPG), all associated with PCL. All hydrogels demonstrated cell viability above 70% of the control group, allowing cellular metabolism observed in the total protein. There was a greater quantification of IL-6 in the CHX group in the two cell lines while the quantification of IL-10 did not show statistical difference between the groups. All hydrogels promoted a marked reduction in the biofilm of K.p and E.c. The CHX, CHXP and CHXG groups reduced S.e biofilm. The CHXG group reduced S.p. For S.a and P.a, the CHXPG group was more effective in reducing biofilm. We conclude that the hydrogels presented satisfactory and promising results, bringing innovation through association of biopolymers and association of phytotherapic extracts little studied. The positive results justify the continuity of studies with this biomaterial(AU)

Stress hormones promote DNA damage in human oral keratinocytes / Hormônios do estresse promovem dano no DNA de queratinócitos humanos de boca

O estresse crônico aumenta os níveis sistêmicos dos hormônios do estresse norepinefrina e cortisol. Assim como o carcinógeno específico do tabaco NNK (4- (metilnitrosamina)-1-(3-piridil)-1-butanona), estes hormônios podem induzir danos expressivos no DNA, o que contribui para o desenvolvimento do câncer. No entanto, é desconhecido se os hormônios do estresse possuem efeitos genotóxicos em queratinócitos de boca. Este estudo investigou os efeitos dos hormônios do estresse sobre o dano no DNA de uma linhagem celular de queratinócitos humanos de boca (NOK-SI). Células NOK-SI estimuladas com norepinefrina ou cortisol apresentaram maior dano no DNA que as células não tratadas. O dano induzido pela norepinefrina foi revertido pelo pré-tratamento das células com um beta-bloqueador. Células tratadas com NNK combinado à norepinefrina apresentaram níveis reduzidos das caspases 3 e 7. O cortisol também reduziu a atividade das enzimas pro-apoptóticas em relação às células não estimuladas. O dano no DNA promovido pelo NNK e cortisol e pela combinação de ambos levou ao acúmulo de γH2AX intracelular. Os efeitos causados pelo NNK e cortisol foram bloqueados com propranolol e com o antagonista do receptor de glicorcorticoide RU486, respectivamente. As quebras no DNA induzidas pela norepinefrina, na presença ou ausência de NNK, resultaram em maiores níveis celulares de 8OHdG. Este efeito também foi induzido via receptores beta-adrenérgicos. Os hormônios do estresse induzem danos no DNA de queratinócitos de boca e poderiam contribuir para a carcinogênese bucal(AU)

Chronic stress increases the systemic levels of stress hormones norepinephrine and cortisol. As well tobacco-specific carcinogen NNK (4-(methylnitrosamine)-1-(3- pyridyl)-1-butanone), they can induce expressive DNA damage contributing to the cancer development. However, it is unknown whether stress hormones have genotoxic effects in oral keratinocytes. This study investigated the effects of stress hormones on DNA damage in a human oral keratinocyte cell line (NOK-SI). NOK-SI cells stimulated with norepinephrine or cortisol showed higher DNA damage than untreated cells. Norepinephrine-induced DNA damage was reversed by pretreatment with beta-adrenergic blocker propranolol. Cells treated with NNK combined to norepinephrine displayed reduced levels of caspases 3 and 7. Cortisol also reduced the activity of pro-apoptotic enzymes. DNA damage promoted by NNK or cortisol and carcinogen combined to the hormone led to intracellular γH2AX accumulation. The effects caused by NNK and cortisol were abolished by propranolol and glucocorticoid receptor antagonist RU486, respectively. DNA breaks induced by norepinephrine in the presence or absence of NNK resulted in higher 8OHdG cellular levels. This effect was also induced through beta-adrenergic receptors. Stress hormones induce DNA damage of oral keratinocytes and could contribute to oral carcinogenesis(AU)

Isolation, cultivation and immunofluorescence characterization of lamellar keratinocytes from equine hoof by using explants / Isolamento, cultivo e caracterização por imunofluorescência de queratinócitos lamelares de casco equino utilizando explantes

The importance of the hoof to the horse health is clear, and the current knowledge regarding the cellular aspects of hoof keratinocytes is poor. Studies on equine keratinocyte culture are scarce. Developing keratinocyte cultures in vitro is a condition for studies on molecular biology, cell growth and differentiation. Some methods have already been established, such as those for skin keratinocyte culture. However, few methodologies are found for lamellar keratinocytes. The objective of this study was to standardize the equine hoof keratinocyte isolation and cultivation, and then characterize the cell immunophenotype. For this, the primary culture method used was through explants obtained from three regions of the equine hoof (medial dorsal, dorsal, and lateral dorsal). After the cell isolation and cultivation, the cell culture and its explants were stained with anti-pan cytokeratin (pan-CK) (AE1/AE3), vimentin (V9), p63 (4A4), and Ki-67 (MIB-1) antibodies. Cells were grown to third passage, were positive for pan-CK, p63 and Ki-67, and few cells had vimentin positive expression. As for the explants, the epidermal laminae were not stained for vimentin or Ki-67. However, some cells presented positive pan-CK and p63 expression. This study demonstrated the viability of lamellar explants of equine hooves as a form of isolating keratinocytes in primary cultures, as well as characterized the proliferation ability of such keratinocytes in monolayers.(AU)

É notória a importância do casco na saúde dos equinos, mas o conhecimento em nível celular é pouco entendido. Estudos envolvendo o cultivo de queratinócitos equinos são escassos. Sabe-se que o desenvolvimento de cultivos de queratinócitos in vitro é uma condição para estudos sobre a biologia molecular, crescimento e diferenciação celular. Alguns métodos já estão estabelecidos, como para cultivo de queratinócitos de pele, mas poucas metodologias são encontradas para queratinócitos lamelares. O objetivo desse estudo foi padronizar o cultivo de queratinócitos provenientes de casco equino visando futuramente associar ao estudo da medicina regenerativa para assim estabelecer um modelo experimental in vitro e indicar o uso criterioso de terapias regenerativas para a laminite equina. Desta forma, o cultivo em monocamada e a caracterização de queratinócitos lamelares foram realizados. Para isso, o método de cultura primária utilizado foi através de explantes obtidos de três regiões do casco (dorso-medial, dorsal e dorso-lateral). As células foram caracterizadas para os marcadores anti pan-cytokeratin (AE1/AE3), vimentin (V9), p63 (4A4) e Ki-67 (MIB-1) nos cultivos e nos explantes. As células foram cultivadas até terceira passagem, tendo marcação positiva para pan-CK, p63 e Ki-67 e fraca marcação para vimentina. Já as lâminas epidermais não tiveram marcação de vimentin e Ki-67, porém marcaram acentuadamente para pan-CK e p63. Este estudo demonstrou a exiquibilidade do uso de explantes lamelares do casco de equinos, como forma de isolamento de queratinócitos em cultivos primários, bem como caracterizou a habilidade de proliferação desses queratinócitos em monocamada.(AU)

Carcinoma espinocelular: reporte de caso en paciente con fototipo tipo 5 según clasificación fitzpatrick / Non-melanoma skin carcinoma: spinocellular carcinoma, case report in a patient with type 5 phototype according to fitzpatrick classification / Carcinoma de pele não melanoma: carcinoma espinocelular, relato de caso em paciente com fototipo v segundo classificação fitzpatrick

Resumen El carcinoma espinocelular es un subtipo de neoplasia que no involucra a los melanocitos, y junto con el carcinoma basocelular, representan el 75% de los carcinomas de piel no melanoma. En Colombia, se calculó que de 2003 a 2007 el cáncer no melanoma registró un incremento de 19 a 39 casos por 100 000 habitantes. El carcinoma espinocelular tiende a aparecer en fototipos de piel 1 y 2, en áreas fotoexpuestas que representan cabeza y cuello (70%), en extremidades superiores (25%) y en zonas no fotoexpuetas como glúteos y mucosas genitales (5%). Este artículo hace un reporte de caso de un carcinoma espinocelular en un paciente de 51 años con un cuadro clínico aproximadamente de dos años que se caracterizó por diversos tumores localizados en labio inferior derecho y maxilar inferior y que estuvo relacionado a exposición solar crónica y presencia de queratosis actínica en cara y cuero cabelludo.

Abstract Spinocellular carcinoma is a subtype of neoplasia that does not involve melanocytes, and together with basal cell carcinoma, they represent 75% of non-melanoma skin carcinomas. In Colombia, it was calculated that from 2003 to 2007 non-melanoma cancer registered an uptick of 19 to 39 cases per 100,000 inhabitants. Spinocellular carcinoma tends to appear in skin phototypes 1 and 2, in photoexposed areas that represent head and neck (70%), in upper extremities (25%) and in non-photoexposed areas such as buttocks and genital mucous membranes (5%). This article makes a case report of a spinocellular carcinoma in a 51-year-old patient with a clinical picture of approximately two years that was characterized by various tumors located in the right lower lip and lower jaw related to chronic sun exposure and presence of actinic keratosis on face and scalp.

Resumo O carcinoma espinocelular é um subtipo de neoplasia que não envolve os melanócitos, e junto com o carcinoma baso-celular, representam 75% dos carcinomas de pele não melanoma. Na Colômbia, calculou-se que de 2003 a 2007 o câncer não melanoma registrou um aumento de 19 a 39 casos por 100 000 habitantes. O carcinoma espinocelular tende a aparecer em fototipos de pele I e II, em áreas fotoexpostas que representam cabeça e pescoço (70%), em extremidades superiores (25%) e em áreas não fotoexpostas como glúteos e mucosas genitais (5%). Este artigo faz um relato de caso de um carcinoma espinocelular num paciente de 51 anos com um quadro clínico aproximadamente de dois anos que se caracterizou por diversos tumores localizados em lábio inferior direito e maxilar inferior e que esteve relacionado à exposição solar crónica e presença de ceratose actínica na cara e no couro cabeludo.

Terapia celular combinada com membranas de biopolímeros melhora a cicatrização de úlceras em paciente com dermatomiosite juvenil / Combining cell therapy with biopolymer films improves wound healing in a juvenile dermatomyositis patient

Introdução: Dermatomiosite juvenil (DMJ) é doença sistêmica que afeta a musculatura proximal e a pele de crianças. A doença ulcerada é um desafio terapêutico. Objetivo: Avaliar a melhora da doença ulcerada na DMJ, pelo uso de terapia celular. Métodos: Realização de cocultura de fibroblastos e queratinócitos autólogos e aplicação dessas células nas úlceras juntamente com cola de fibrina e colocação de membrana de quitosana-alginato ou quitosana-xantana sobre as lesões. Resultados: Menos de 12 horas após a terapia, o paciente referiu completa eliminação da dor e, dentro de dois dias, estava presente tecido de cicatrização. Algumas das úlceras estavam quase completamente cicatrizadas no final da primeira semana, e algumas das calcinoses desapareceram. Essa técnica não cura a doença, mas melhora a qualidade de vida, sendo possível criopreservar as células saudáveis do paciente para tratar novas lesões. Sendo as células de origem autóloga, elimina-se o risco de rejeição. Além disso, esse procedimento não necessita de debridamento das lesões nem hospitalização. Conclusões: A aplicação de culturas autólogas de fibroblastos e queratinócitos em úlceras já é considerada tratamento efetivo em pacientes com queimaduras e outras feridas cutâneas e, agora mostrou-se também eficaz no tratamento de feridas na DMJ.

Introduction: Juvenile dermatomyositis (JDM) is a systemic disease that affects children's proximal musculature and skin. The ulcerated stage of the disease is a therapeutic challenge. Objective: To evaluate the improvement of ulcerated stage of JDM caused by the use of cell therapy. Methods: Co-culture of autologous fibroblasts and keratinocytes, application of these cells in ulcers in conjunction with fibrin glue, and placement of chitosan-alginate or chitosan-xanthan membrane on the lesions. Results: Less than 12 hours after therapy, the patient reported complete cessation of pain and, within 2 days, healing tissue emerged. Some of the ulcers were almost completely healed by the end of the 1st week, and some of the calcinoses disappeared. This technique does not cure the disease, however it improves the patient's quality of life, and it is possible to cryopreserve healthy cells to treat new lesions. Given the fact that the cells are of autologous origin, the risk of rejection is eliminated. Furthermore, this procedure does not require debridement of the lesions or hospitalization. Conclusions: The application of autologous cultures of fibroblasts and keratinocytes in ulcers is already considered an effective treatment in patients with burns and other skin wounds, and has now also been proven effective in the treatment of wounds in JDM.

Histological and morphometric characteristics of the corneal layer of buffalo hoof capsules / Características histológicas y morfométricas de la capa cornea de las cápsulas del casco de búfalo

SUMMARY: This study aimed to evaluate the microstructure of the buffalo's hoof capsule using hystomorphometry and computerized light microscopy. The length, thickness, gap and number of epidermal papillae and the morphology of the corneal tubules of the hoof were described in this paper. This study used 56 hoof capsules from hooves of 14 adults - age ranging from 24 to 60 months old - female buffaloes of the Jafarabadi breed; weighing around 650 kg. Fifty-six samples, 28 from thoracic limb and 28 from pelvic limbs, were analyzed, resulting in a total of 112 digits. Clinical specimens were collected at the coronary corium, laminar corium of the abaxial wall and pre-bulbar soles. The study concluded that the microstructure of the hoof capsule of buffalo hooves are made of epidermal papillae measuring 1,721.59 mm of length, 62.94 mm of thickness and 49.02 mm of gap between the papillae. This study determines that the coronary corium has more epidermal papillae than the laminar corium of the abaxial wall and pre-bulbar soles. The corneal tubules of the hoof capsules exhibit helical fashion and points to the possibility of applying this feature to the hooves of the biungulate species as well. In this research, we have been able to determine morphological parameters not yet described in scientific literature. These findings can be used in future comparative studies of healthy cattle and buffaloes and speculate evidence about the hooves' vulnerability facing different hoof diseases.

RESUMEN: El objetivo del estudio fue evaluar la microestructura de la cápsula del casco del búfalo mediante histomorfometría y microscopía óptica computarizada. Se describe la longitud, el espesor, el espacio y el número de papilas epidérmicas y la morfología de los túbulos corneales del casco. Utilizamos 56 cápsulas de cascos de 14 hembras adultas entre 24 a 60 meses de edad de la raza Jafarabadi, cuyo peso aproximado era de 650 kg. Analizamos 56 cascos, 28 del miembro torácico y 28 del miembro pélvico, con un total de 112 dedos. Se recogieron especímenes clínicos en el corion coronario, corion laminar de la pared abaxial y suelas pre-bulbares. Concluimos que la microestructura de la cápsula de los cascos de los búfalos está formada por papilas epidérmicas de 1.721,59 mm de longitud, 62,94 mm de espesor y 49,02 mm de espacio entre papilas. Se determinó que el corion coronario tiene más papilas epidérmicas que el corion laminar de la pared axial y las suelas pre-bulbares. Los túbulos córneos de las cápsulas de casco presentan una forma helicoidal y existe la posibilidad de que esta característica también se aplique a las pezuñas de otras especies de animales biungulados. También se determinaron algunos parámetros morfológicos no descritos en la literatura científica. Estos hallazgos pueden ser útiles en estudios comparativos de ganado bovino y bubalino saludable y en consideración de la 'vulnerabilidad' frente a diferentes enfermedades del casco.

Cuidado de enfermagem ao paciente queimado adulto: uma revisão integrativa / Nursing care of adult burn patient: an integrative review / Cuidado de enfermería al paciente quemado adulto: una revisión integrativa

Objetivo: Verificar os estudos disponíveis sobre o cuidado de enfermagem ao paciente queimado adulto, publicados de janeiro de 2005 a junho de 2016, para a sustentação da decisão clínica diante das especificidades das situações com que se deparam no seu dia-a-dia de trabalho. Método: Revisão integrativa realizada em seis bases de dados, em 23 de junho de 2016, utilizando os descritores ou palavras chave: guideline, guidelines, protocolo, protocolos, queimaduras, queimado, queimados, diretriz, enfermagem, guias relacionados ao cuidado de enfermagem para o paciente queimado adulto. Foi realizado o cruzamento dos descritores utilizando a lógica dos recursos booleanos no campo de busca. Resultados: Foram selecionados 616 artigos, dos quais permaneceram 53 após a leitura de títulos e resumos que foram lidos na íntegra. Quatro atenderam aos critérios de inclusão. O tratamento do paciente grande queimado deve visar a manutenção das estruturas e funcionalidade do corpo; controlar a dor; a contínua educação dos profissionais e dos pacientes. A reabilitação deve ser iniciada no hospital, mantendo as áreas doadora e receptora úmidas e livres de infecção; estabilizando clinicamente. No domicílio as intervenções deverão favorecer o aumento da força e tônus muscular e equilíbrio do paciente, reestabelecendo a funcionalidade e diminuindo sequelas físicas e motoras. Conclusões: Destaca-se que a cultura de queratinócitos é uma técnica descrita há mais de 20 anos e que, apesar da complexidade e custo, tornou-se uma poderosa arma no tratamento de pacientes grandes queimados, compensando o alto custo do produto com a sobrevivência do paciente.

Objective: To verify the available studies on nursing care of adult patients with burns, that were published from January 2005 to June 2016, in order to support clinical decisions facing specificities of some situations nurses come across in their daily work. Methods: Integrative review carried through in six databases in June 23th 2016, using the descriptors or keywords: guideline, guidelines, protocol, protocols, burnings, burns, burnt, directive, nursing, guides related to nursing care of adult burn patient. We used Boolean resources logic in the search field to perform the crossing of the descriptors. Results: We selected 616 articles, of which 53 remained after reading the titles and abstracts entirely. Four of them met the inclusion criteria. The treatment of adult patients with burns should focus on maintaining the bodys structures and functionality; on controlling pain; on the continuous education of the professionals and patients. The rehabilitation must be initiated in the hospital, keeping the donor and recipient areas humid and free from infection; stabilizing clinically. The interventions at home must favor the increase of muscle strength and tone and patients balance, which restores functionality and decreases physical and motor after-effects. Conclusions: It is worth highlighting that keratinocyte culture is a technique that has been described over 20 years ago. Despite its complexity and cost, it became a powerful weapon in the treatment of adult burn patients, compensating the high cost of the product with the survival of the patient.

Objetivo: Averiguar los estudios disponibles sobre el cuidado de enfermería al paciente quemado adulto, publicados desde enero del 2005 a junio del 2016 para el sustento de la decisión clínica delante de las especificidades. Método: Revisión integrativa realizada en seis bases de datos, en 23 de junio del 2016, utilizando descriptores o palabras clave: guideline, guidelines, protocolo, protocolos, quemaduras, quemado, quemados, directriz, enfermería, guías relacionados al cuidado de enfermería para el paciente quemado adulto. Fue realizado el cruce de los descriptores utilizando la lógica de los recursos booleanos en el campo de búsqueda. Resultados: Fueron seleccionados 616 artículos, de los cuales permanecieron 53 después de la lectura de títulos y resúmenes que fueron leídos en la íntegra. Cuatro atendieron a los criterios de inclusión. El tratamiento del paciente grande quemado debe visar el mantenimiento de las estructuras y funcionalidad del cuerpo; controlar el dolor; la continua educación de los profesionales y de los pacientes. La rehabilitación debe ser iniciada en el hospital, manteniendo las áreas donante y receptora húmedas y libres de infección; estabilizando clínicamente. En el domicilio las intervenciones deberán favorecer el aumento de la fuerza y contracción muscular y equilibrio do paciente, restableciendo la funcionalidad y disminuyendo secuelas físicas y motoras. Conclusiones: Se destaca que la cultura de queratinocitos es una técnica descripta hace más de 20 años y que, pese la complejidad y costo, se volvió en una poderosa arma en el tratamiento de pacientes grandes quemados, compensando el alto costo del producto con la supervivencia del paciente.

Aloinjertos análogos de mucosa bucal en ratas no consanguíneas / Oral mucosa analog allografts in non-consanguineous rats

Resumen Introducción: A pesar de que existen opciones terapéuticas para el tratamiento de defectos de la mucosa bucal, persiste la necesidad de encontrar sustitutos funcionales, anatómicos y estéticamente similares al tejido que se va a reemplazar, así como soluciones que reduzcan la morbilidad de los injertos autólogos. Objetivo: Determinar la compatibilidad clínica e histológica de aloinjertos equivalentes de mucosa bucal elaborados mediante ingeniería tisular en ratas no consanguíneas. Materiales y métodos: Se utilizó una muestra de mucosa bucal de ratas Sprague Dawley para la obtención de un cultivo de fibroblastos y otro de queratinocitos y fibroblastos. En ambos casos, se usó una membrana de colágeno comercial como soporte. Después de diez semanas de cultivo, las membranas resultantes se injertaron en cuatro ratas Wistar. La primera fase del estudio consistió en la elaboración de los tejidos análogos de mucosa bucal mediante ingeniería tisular, los cuales se implantaron en ratas Wistar inmunocompetentes; posteriormente, se evaluaron las características clínicas e histológicas del aloinjerto. Resultados: La evaluación in vivo de los tejidos análogos demostró que se habían integrado correctamente en los huéspedes inmunocompetentes, y se había logrado el aumento del biotipo periodontal y la creación de una zona con mayor queratinización. Desde el punto de vista histológico, el tejido adquirió características similares a las de la muestra de mucosa bucal de control, sin ningún tipo de reacción inflamatoria ni signos clínicos o histológicos de rechazo. Conclusión: Hubo compatibilidad clínica e histológica de los aloinjertos equivalentes de mucosa bucal obtenidos mediante ingeniería tisular.

Abstract Introduction: Although there are therapeutic options for the treatment of oral mucosa defects, the need for functional, anatomical and aesthetically similar substitutes persists, as well as for solutions to reduce autologous grafts morbidity. Objective: To determine clinical and histological compatibility of equivalent oral mucosa allografts generated through tissue engineering in non-consanguineous rats. Materials and methods: We used a sample of oral mucosa from Sprague Dawley rats to obtain a fibroblast culture and a keratinocytes and fibroblasts co-culture. In both cases, we used a commercial collagen membrane as "scaffold". After ten weeks of culture, we grafted the resulting membranes into four Wistar rats. The first phase of the study was the development of the oral mucosa equivalents generated by tissue engineering. Then, we implanted them in immunocompetent Wistar rats, and finally we evaluated the clinical and histological features of the allografts. Results: In vivo evaluation of mucosal substitutes showed a correct integration of artificial oral mucosa in immunocompetent hosts, with an increase in periodontal biotype and the creation of a zone with increased keratinization. Histologically, the tissue was similar to the control oral mucosa sample with no inflammatory reaction nor clinical or histological rejection signs. Conclusion: The equivalent oral mucosa allografts generated by tissue engineering showed clinical and histological compatibility.

O papel da autofagia no estresse oncogênico promovido por HRASG12V em queratinócitos humanos imortalizados por E6E7 / The role of autophagy in the face of the oncogenic stress triggered by HRASG12V in human keratinocytes immortalized by E6E7

RAS é a oncoproteína mutada mais encontrada em tumores sólidos, o que mostra seu grande potencial transformador. Não obstante, células que carregam essa mutação apresentam estresse oncogênico gerado por excessiva sinalização mitogênica, o que direciona preferencialmente as células portadoras para a morte em detrimento da transformação maligna. Basicamente a transformação direcionadapela proteína RAS mutada age sinergicamente com deficiência em supressores de tumor para evitar o destino celular preferencial frente ao estresse oncogênico. Este é o caso da interação observada entre HRASG12V e E6E7 de HPV, sendo que a infecção pelo vírus aparentemente é condição necessária em cânceres cervicais e muito presente em cânceres de cabeça e pescoço. A sinergia entre HRASG12V e queratinócitos imortalizados por E6E7 desequilibra o balanço homeostático entre subsistemas pró-morte, devido ao estresse oncogênico, ou pró-sobrevivência, que garante viabilidade por meio de novos padrões de robustez celular. Em ambos os casos, o processo que gera uma célula transformada, ou as elimina pelo caminho, apresenta pistas de vulnerabilidades às quais os queratinócitos são expostos uma vez que carreguem tal combinação de fatores. Apresentamos nesse trabalho os principais atores que compõem o estresse oncogênico deletério desencadeado pela atividade de HRASG12V: estresse mitogênico, replicativo e oxidativo; todos eles são responsáveis por provocar dano no DNA, que por sua vez promove parada no ciclo celular até que as células não possam mais suportar tamanha injúria, o que acaba levando-as maciçamente a morte. Mostramos que a alta intensidade mitogênica gerada pela atividade de HRASG12V provoca um desequilíbrio metabólico que leva ao aumento de espécies oxidantes e ao estresse replicativo. Todavia, um tratamento exógeno com o antioxidante NAC restaurou parcialmente a proliferação celular assim como a sobrevivência, agindo como um amenizador do dano no DNA gerado pelas espécies oxidantes. Já uma suplementação com nucleosídeos exógenos restaurou fortemente a sobrevivência celular, sugerindo que o desequilíbrio metabólico pode estar agindo no pool de nucleotídeos, o que poderia ser uma das causas do estresse replicativo. Como mecanismo intrínseco de sobrevivência, a autofagia se intensifica em resposta ao desequilíbrio sistêmico desencadeado pela atividade de HRASG12V. Por meio de sublinhagens defectivas para autofagia, mostramos que o processo retarda o aparecimento de espécies oxidantes, além de evitar sua elevação a níveis ainda mais drásticos, o que consequentemente ameniza o dano no DNA observado. Além disso, hipotetizamos que o processo poderia também estar contribuindo fortemente para a reciclagem de substratos básicos tais como nucleotídeos, assim acarretando em menor estresse replicativo. Na literatura atual, debate-se a noção de que, dependendo do contexto celular, a autofagia poderia promover tanto morte celular como transformação maligna. Entretanto, nesta tese mostramos que, na interação entre queratinócitos, E6E7 e HRASG12V, a autofagia é um mecanismo pró-sobrevivência: se por um lado a demanda autofágica é recrutada além de sua capacidade de processamento, fazendo com que seu fluxo seja bloqueado, por outro a eliminação do sistema se torna demasiadamente deletério, direcionando as células expostas ao estresse oncogênico causado pela atividade de HRASG12V necessariamente à morte.

Mutated RAS is the oncoprotein most found in solid tumors, which shows its huge tumorogenic potential. Despite of that, mutated RAS triggers a strong oncogenic stress, which very often drives cells to death instead of malignant transformation. Basically, the success of the Ras malignant transformation driving activity depends on a synergy between that mutated protein and inhibition of tumor suppression genes. This is the case of the interaction between HRASG12V and E6E7 proteins of HPV: It seems that HPV infection is an initial necessary condition for cervical cancer development and is also very frequent in head and neck carcinomas. The synergy between HRASG12V and E6E7, in pre-malignant keratinocytes, imbalances the homeostasis between pro-death subsystems, due oncogenic stress, and pro-survival subsystems that ensure new patterns of cellular robustness. In both cases, the process responsible for generating a malignant transformed cell or, more frequently, eliminating those cells carrying the combined characteristics, exposes the keratinocytes vulnerabilities. We showed in this work that the main actors of deleterious oncogenic stress triggered by HRASG12V activity are: Mitogenic, replicative and oxidative stresses; all of them induce DNA damage, hence cell cycle arrests until the cell cannot resist such injury any further, which leads to massive cell death. The intense mitogenic activity triggered by HRASG12Vcauses metabolic imbalance, which is responsible for an increase of oxidative species and replicative stress levels; the exogenous treatment with antioxidant NAC partially restored cell growth and cell survival, acting as a softener of the DNA damage caused by oxidative species. On the other hand, nucleoside supplementation strongly restored cell survival, suggesting that the aforementioned metabolic imbalance might be acting in the pool of nucleotides, hence it might be a possible cause of replicative stress. As an intrinsic survival mechanism, the autophagy is intensified in response to systemic imbalance triggered by HRASG12V activity. Through the autophagy defective subline, we showed that that mechanism both delays the increase of oxidative species and avoids their elevation to catastrophic highlevels. Furthermore, autophagy could strongly contribute to the recycling of basic substrates such as nucleotides, which might be mitigating the replicative stress. Nowadays, there is a debate on the role of autophagy promoting either malignant transformation or cell death depending on metabolic context. In this work, we showed an instance of the interaction between E6E7 and HRASG12V triggering autophagy pro-survival mechanisms and hence increasing general cell viability

Efeito de suplementação nutricional no fortalecimento e crescimento das lâminas ungueais / Nutritional supplementation effect ON THE nail PLATE'S strength and growing

Introdução: "unhas quebradiças", ou que não crescem, constituem queixa relativamente frequente na prática dermatológica; entretanto, há poucos estudos sobre a influência nutricional nessa queixa Objetivo: avaliar a possível influência de suplemento nutricional na melhora da resistência da lâmina ungueal, bem como de seu crescimento Material e Métodos: 45 pacientes com queixas de unhas frágeis/quebradiças foram observadas durante 16 semanas, sob uso de suplemento nutricional contendo vitaminas e oligoelementos em ingestão diária recomendada com avaliações clínicas e subjetivas em oito, 12 e 16 semanas. Resultados: houve melhora nos parâmetros força, resistência, crescimento e integridade ungueais a partir de oito semanas, melhora que progride com o uso continuado do suplemento, permitindo afirmar que esse tratamento levou a perceptível melhora da qualidade da lâmina ungueal. Conclusões: O suplemento nutricional avaliado se mostrou seguro e eficaz na melhora de sinais de enfraquecimento ungueal, como perda da resistência e redução da velocidade de crescimento.

Introduction: Brittle nails or nails that do not grow are relatively frequent complaints in the dermatological practice, nonetheless there are few studies on how nutrition influences these symptoms. Objective: To evaluate the possible influence of nutritional supplementation for improving the nail plate's resistance and growth. Methods: Forty-five patients complaining of fragile/brittle nails were observed for 16 weeks under recommended daily intake of a nutritional supplement containing vitamins and trace elements, having undergone clinical and subjective evaluations in Weeks 8, 12 and 16. Results: There were improvements in the parameters strength, resistance, growth and nail integrity from Week 8, with further progress after continued use of the supplement, allowing the conclusion that this treatment led to noticeable improvement of the nail plate's quality. Conclusions: The nutritional supplement evaluated was safe and effective in improving the signs of nail weakening, including loss of resistance and reduction of growth rate.

Comportamiento clínico de análogo de mucosa bucal injertado en recesiones gingivales inducidas en modelos animales / Clinical behavior of oral mucosa analoguegrafted in gingival recession inducedin animal models

Objetivo: determinar la actividad de un injerto basado en el cocultivo de fibroblastos gingivales y queratinocitos en membrana de colágeno comercial Mem-Lok(R) (BioHorizons), Alabama, Estados Unidos) en el tratamiento de recesiones gingivales. Materiales y métodos. Esta investigación fue descriptiva y de diseño experimental. La muestra se conformó de 10 ratas Sprague Dawley a las que se indujeron recesiones gingivales. A 8 de ellas se les aplicó el injerto y las 2 restantes no recibieron tratamiento. Resultados: el análisis descriptivo de los resultados determinó la posibilidad de obtener un cocultivo celular. Luego de la aplicación del injerto, las características clínicas periodontales indicaron salud, consistencia firme, textura a manera de puntillado, contorno festoneado, biotipo grueso, sondaje periodontal de 1 mm y posición de la encía a nivel del límite amelocementario. Conclusiones: el injerto aplicado logró una cobertura radicular del 100 por ciento en todos los casos. No se observó sangrado ni contracción cicatrizal.

Aim: to determine the effectiveness of a graft based onco-cultivation of gingival fibroblast and keratinocytes in commercial collagen membrane Mem-Lok® (BioHorizons, Alabama,USA) in the treatment of gingival recessions. Materials and methods: This research was descriptiveand experimental in design. The sample was composed of 10 Sprague Dawley rats which were induced gingival recession; two of them were not treated and the graft was applied in eightof them. Results: A descriptive analysis of the results was performed, which showed that it was possible to obtain a cellco-culture. After the application of the graft, clinical periodontal characteristics were observed that indicated health: the consistency was firm, the texture resembled dots, scallopedand knife edge margin, a thick biotype and the depth ofgingival sulcus was 1 mm. Conclusions: The applied graft achieved a 100% radicularcoverage in all cases and no bleeding or scar contractionwas observed.

Avaliação da atividade anti-inflamatória do Umidit® AI creme e do Umidit® AI loção em cultura de queratinócitos humanos normais expostos a agente surfactante irritante / Evaluation of anti-inflammatory activity of Umidit® AI cream and Umidit® AI lotion in cultured normal human keratinocytes exposed to irritating surfactant

Este estudo experimental avalia a atividade anti-inflamatória do Umidità AI creme e do Umidità AI loção em cultura de queratinócitos humanos normais expostos ao surfactante irritante SDS (dodecil sulfato de sódio).

Bioingeniería de tejidos: cultivo de queratinocitos humanos en el tratamiento de la epidermólisis bullosa / Treatment of epidermolysis bullosa with allogeneic human cultured queratinocytes

Background: Epidermolysis bullosa (EB) or "crystal skin" is a group of inherited disorders that affect the protein that forms the anchor between dermis and epidermis, producing blister injuries. Case report: We report a four years old boy with junctional EB and lesions in 80 percent of the body lasting 48 months. His right lower limb was treated with allogeneic human cultured queratinocytes during five weeks. After the treatment period, a re-epithelization of 90 percent of the intervened limb was observed. Its diameter increased from 23 to 27 cm, the wound assessment scale score decreased from 30 to 13 and the visual analogue pain assessment score decreased from eight to two. Therefore allogeneic human cultured queratinocytes are a novel therapeutic alternative for EB.

Introducción: La epidermólisis Bullosa (EB) o "piel de cristal" es un grupo de trastornos hereditarios, el cual afecta las proteínas que forman la unión dermo-epidérmica de piel y mucosas, lo que lleva a la formación de lesiones ampollares. Objetivo: Comunicar la primera intervención con cultivos de queratinocitos humanos alogénicos (CQHA) en el tratamiento de la EB, en un centro de salud familiar de Chile el año 2013. Metodología: Se presenta el caso de un paciente de 4 años, quien presentaba lesiones en el 80 por ciento del cuerpo de 48 meses de evolución. Se realizó una intervención de la extremidad inferior derecha con el 90 por ciento comprometido con CQHA durante 5 sem con el fin de lograr la reepitelización y formación de piel indemne. Resultados: Posterior a las 5 sem del tratamiento se logró reepitelización del 90 por ciento de la extremidad intervenida, incremento del diámetro de la pierna de 23 a 27 cm., en la escala de valoración de heridas se reduce de 30 a 13 puntos y en la escala de valoración análoga del dolor de 8 a 2 puntos. Conclusión: Se presenta una alternativa terapéutica para pacientes con EB.

Queratinocitos y queratinización / Keratinocytes and keratinization

En esta revisión se detallan las características del queratinocito y los eventos morfológicos y bioquímicos para su transformación en corneocito, así como también el proceso de adhesión y movilidad a través de los estratos epidérmicos. Se realiza, además, una breve descripción de las queratinas y la relación de sus alteraciones con diversas genodermatosis...

In this review we detail the characteristics of the keratinocyte and the morphological and biochemical events for its transformation in corneocyte as well as its adhesion and motility through the epidermal layers. In addition, a brief description of the keratins and the relationship of its alterations with several genodermatosis is provided...

Mechanisms regulating melanogenesis* / Mecanismos reguladores da melanogênese

Skin pigmentation is an important human phenotypic trait whose regulation, in spite of recent advances, has not yet been fully understood. The pigment melanin is produced in melanosomes by melanocytes in a complex process called melanogenesis. The melanocyte interacts with endocrine, immune, inflammatory and central nervous systems, and its activity is also regulated by extrinsic factors such as ultraviolet radiation and drugs. We have carried out a review of the current understanding of intrinsic and extrinsic factors regulating skin pigmentation, the melanogenesis stages and related gene defects. We focused on melanocyte-keratinocyte interaction, activation of melanocortin type 1 receptor (MC1-R) by peptides (melanocyte-stimulating hormone and adrenocorticotropic hormone) resulting from proopiomelanocortin (POMC) cleavage, and mechanisms of ultraviolet-induced skin pigmentation. The identification and comprehension of the melanogenesis mechanism facilitate the understanding of the pathogenesis of pigmentation disorders and the development of potential therapeutic options.

A pigmentação da pele é um importante traço fenotípico do ser humano mas apesar dos recentes avanços a sua regulação não está ainda totalmente esclarecida. O pigmento melanina é produzido nos melanossomas pelos melanócitos, num processo complexo designado por melanogénese. O melanócito interatua com os sistemas endócrino, imunitário, inflamatório e nervoso central e a sua atividade é também regulada por fatores extrínsecos como a radiação ultravioleta e fármacos. Fizemos uma revisão do conhecimento atual sobre os fatores intrínsecos e extrínsecos reguladores da pigmentação cutânea, etapas da melanogénese e defeitos genéticos relacionados. Fizemos enfoque na interação melanócito-keratinócito, na ativação do receptor da melanocortina tipo 1 (MC1-R) pelos péptidos (hormona estimuladora do melanócito e hormona adrenocorticotrófica) resultantes da clivagem da proopiomelanocortina (POMC) e mecanismos da pigmentação induzida pela radiação ultravioleta. A identificação e compreensão dos mecanismos reguladores da pigmentação cutânea facilitam o conhecimento dos mecanismos patogénicos dos distúrbios da pigmentação e o desenvolvimento de potenciais opções terapêuticas.